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中华临床医师杂志(电子版) ›› 2017, Vol. 11 ›› Issue (14) : 2033 -2037. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2017.14.005

所属专题: 文献

基础论著

低浓度Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离幼年SD大鼠睾丸间质细胞
李阳1, 王宇1, 程康1, 刘春1,()   
  1. 1. 030001 太原,山西医科大学第一医院泌尿外科
  • 收稿日期:2017-02-16 出版日期:2017-07-15
  • 通信作者: 刘春
  • 基金资助:
    山西省自然科学基金(2015011127)

Isolation of rat Leydig cells with combined low-concentration type Ⅱ and Ⅳ collagenases

Yang Li1, Yu Wang1, Kang Cheng1, Chun Liu1,()   

  1. 1. Department of Urinary Surgery, the First Affiliated Hospital, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China
  • Received:2017-02-16 Published:2017-07-15
  • Corresponding author: Chun Liu
  • About author:
    Corresponding author: Liu Chun, Email:
引用本文:

李阳, 王宇, 程康, 刘春. 低浓度Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离幼年SD大鼠睾丸间质细胞[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2017, 11(14): 2033-2037.

Yang Li, Yu Wang, Kang Cheng, Chun Liu. Isolation of rat Leydig cells with combined low-concentration type Ⅱ and Ⅳ collagenases[J/OL]. Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition), 2017, 11(14): 2033-2037.

目的

探索一种简单有效的大鼠睾丸间质细胞的分离、纯化方法。

方法

采用0.1%Ⅱ、Ⅳ型胶原酶混合液消化组织块分离睾丸间质细胞,用差速贴壁法纯化间质细胞,用3β-HSD免疫荧光染色鉴定间质细胞,同时用酶联法测定间质细胞分泌睾酮的活性。

结果

(1)采用0.1%Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离睾丸间质细胞的最佳酶解时间为1 h左右。(2)利用差速贴壁纯化睾丸间质细胞的最佳贴壁时间为1~2 h。(3)培养24 h后,3β-HSD免疫荧光染色鉴定睾丸间质细胞纯度达(98.1±1.5)%,盼蓝染色鉴定睾丸间质细胞存活率达(97.3±1.6)%。(4)贴壁后培养12 h,睾丸间质细胞即达分泌高峰。

结论

本实验建立了一种简便易行、稳定可靠的原代睾丸间质细胞分离纯化方法,通过此法能够获得足够多具高活性的高纯度睾丸间质细胞,并且睾丸间质细胞增殖能力较强。

Objective

To establish a simple and effective method to isolate and purify rat Leydig cells.

Methods

Leydig cells were digested with a mixture of 0.1% types II and IV collagenases, purified by differential adherence, and identified by 3β-HSD immunofluorescence staining. The testosterone-secreting capability of Leydig cells was determined by ELISA.

Results

The optimal enzyme digestion time for Leydig cells was about 1 hour. The best adherence time for the purification of Leydig cells was 1-2 h. After 24 hours of culture, the purity of Leydig cells was (98.1 ± 1.5)% as revealed by 3β-HSD immunofluorescence staining, and the survival rate of Leydig cells was (97.3 ± 1.6)%. After incubation for 12 hours, the Leydig cells reached the peak of secretion.

Conclusion

In this study, a simple, stable, and reliable method for isolation and purification of primary Leydig cells was established. This method allows to obtain high-purity Leydig cells with high activity.

图3 台盼蓝染色LC细胞图片(×4)
表1 不同酶解时间贴壁2 h所得睾丸间质细胞情况(±s
表2 不同贴壁时间酶解1 h所得睾丸间质细胞情况(±s
图8 蓝光照射下3β-HSD免疫荧光染色Leydig细胞爬片(×10)
[1]
Chen H, Ge RS, Zirkin BR. Leydig cells: From stem cells to aging [J]. Mol Cell Endocrinol, 2009, 306(1-2):9-16.
[2]
Lacombe A, Lelievre V, Roselli CE, et al. Delayed testicular aging in pituitary adenylate cyclase-activating peptide (PACAP) null mice [J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006, 103(10):3793-3798.
[3]
Dobashi M, Fujisawa M, Yamazaki T, et al. Inhibition of steroi-dogenesis in Leydig cells by exogenous nitric oxide Occurs inde-pendently of steroidogenic acute regulatory protein(star) mRNA [J]. Arch Androl, 2001, 47(3):203-209.
[4]
Neaves WB, Johnson L, Porter JC, et al. Leydig cell numbers, daily sperm production, and serum gonadotropin levels in aging men [J]. J Clin Endocrinol Metab, 1984, 59(4):756-763.
[5]
Chen H, Cangello D, Benson S, et al. Age-related increase in mitochondrial superoxide generation in the testosterone-producing cells of Brown Norway rat testes: relationship to reduced steroido-genic function ? [J]. Exp Gerontol, 2001, 36(8):1361-1373.
[6]
Klinefelter GR, Hall PF, Ewing LL. Effect of luteinizing hormone deprivation in situ on steroidogenesis of rat Leydig cells purified by a muhistep procedure [J]. Biol Reprod, 1987, 36(3):769-783.
[7]
王晓云,邢新,周广东, 等. 简易快速获得大量高纯度大鼠Leydig细胞 [J]. 中华泌尿外科杂志, 2007, 28(S1):86-90.
[8]
应锋,龚昳,孙佳音, 等. 大鼠睾丸间质细胞的原代培养、鉴定与功能监测 [J]. 中华男科学杂志, 2008, 14(1):7-10.
[9]
Lakkakorpi JT, Yang M, Rajaniemi HJ. Processing of the LH/CG receptor and bound hormone in rat luteal cells after hCG- induced down-regulation as studied by a double immunofluorescence technique in conjunction with confocal laser scanning microscopy. J Histochem Cytochem, 1994, 42(6):727-732.
[10]
孙祥宙,邓春华,郭海彬, 等. 成人睾丸间质细胞的培养和鉴定 [J]. 中华男科学杂志, 2005, 11(5):356-358.
[11]
应锋,龚昳,韩晓冬. 壬基酚对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌雄激素影响的研究 [J]. 中华男科学杂志, 2006, 12(4):300-302.
[12]
Yang JM, Arnush M, Chen QY, et al. Cadmium-induced damage to primary cultures of rat Leydig cells. [J]. Reprod Toxicol, 2003, 17(5):553-560.
[13]
窦京涛,李江源. 人绒毛膜促性腺激素对大鼠睾丸相关激素受体的影响 [J]. 中华医学杂志, 1994, 74(9):570-571.
[14]
况海斌,王新长,方廉. 大鼠睾丸间质细胞分离及其鉴定 [J]. 南昌大学学报(医学版), 2002, 42(5):7-9.
[15]
张红娟,邵莉进,陈新磊, 等. 大鼠睾丸间质祖细胞的原代培养及生长状况观察 [J]. 河北医药, 2010, 32(2):185-186.
[16]
赵为民,杨建英,代涛, 等. 小鼠睾丸间质细胞体外原代培养方法的建立 [J]. 中国组织工程研究, 2011, 15(46):8665-8667.
[17]
钟量,孙杰,陈凡凡, 等. 低浓度胶原酶差速消化法分离纯化小鼠Leydig细胞的研究 [J]. 中华小儿外科杂志, 2010, 31(9):694-697.
[18]
闫秀文. bFGF对大鼠骨髓间充质干细胞向睾丸间质细胞分化的作用研究[D]. 太原:山西医科大学, 2015.
[19]
E-Ally M, Luu-The V, Huang XF, et al. Localization of type 517 beta-hydroxysteroid dehydrogenase, 3beta-hydroxysteroid dehy- drogenase, and androgen receptor in the hunmn prostate by in situ hybridization and immunooytochemistry [J]. Endocrinology, 1999, 140(3):1481-1491.
[1] 刘思锐, 赵辰阳, 张睿, 张一休, 杨萌. 多普勒超声对孕鼠子宫动脉不同节段血流动力学参数的评估[J/OL]. 中华医学超声杂志(电子版), 2024, 21(09): 877-883.
[2] 李朋, 苗立帅, 朱智奇. 四氢嘧啶对大鼠关节软骨细胞的保护作用[J/OL]. 中华关节外科杂志(电子版), 2024, 18(01): 69-77.
[3] 林琳, 田思萌, 于永华, 徐飞飞, 黄明莉. 干细胞及其外泌体治疗宫腔黏连的研究现状[J/OL]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2024, 20(03): 271-275.
[4] 邓健, 王少华, 陈尊, 邹振庄. Keap1/Nrf2信号通路在脂多糖诱导宫内感染致新生鼠支气管肺发育不良的作用机制[J/OL]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2023, 19(06): 665-674.
[5] 仲卫冬, 胡根, 邵国益. 腹腔开放合并肠空气瘘的管理[J/OL]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2024, 19(05): 462-462.
[6] 杨文飞, 郝嘉文, 鲁梦远, 赵学刚, 李聪颖, 盖晨阳, 张晶, 张庆富. 高压电烧伤对大鼠心肌氧化应激的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预作用[J/OL]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2024, 19(02): 106-112.
[7] 李维, 莫俊俏. 儿童呼吸道耐药流感嗜血杆菌基因型鉴定及耐药分析对抗菌药物治疗选择的意义[J/OL]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2023, 17(05): 315-323.
[8] 张礼刚, 邹志辉, 许顺, 蔡可可, 胡永涛, 梁朝朝. 酒精对慢性非细菌性前列腺炎中T淋巴细胞变化的影响研究[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(01): 74-81.
[9] 王苏睿, 胡根, 邵国益. A 型肉毒杆菌毒素在腹腔开放后腹壁缺损修复中的应用[J/OL]. 中华疝和腹壁外科杂志(电子版), 2024, 18(06): 649-653.
[10] 赛甫丁·艾比布拉, 买买提·依斯热依力, 李义亮, 王永康, 王志, 克力木·阿不都热依木. 不同材质补片修补对腹壁疝大鼠腹横筋膜组织转化生长因子-β1及Collagen合成代谢的作用[J/OL]. 中华疝和腹壁外科杂志(电子版), 2024, 18(02): 161-167.
[11] 李斌, 康欣, 宋应寒, 雷文章. 完全腔镜下腹直肌后修补术治疗产后腹直肌分离经验分享[J/OL]. 中华疝和腹壁外科杂志(电子版), 2024, 18(02): 208-213.
[12] 李炳根, 龚独辉, 赖泽如, 聂向阳. 产后腹直肌分离全腔镜下肌后/腹膜外补片修补术的临床研究[J/OL]. 中华疝和腹壁外科杂志(电子版), 2023, 17(06): 724-727.
[13] 刘锦程, 王斌, 张雯, 张明周, 刘禹, 叶东樊, 黄赞胜, 邱凌霄, 卿斌, 王创业, 王南博, 王苹, 郭宇航, 周培花, 程秋霞, 徐智. 肺泡灌洗液RASSF1A及SHOX2甲基化联合径向超声特征对肺结节性质鉴别诊断的意义[J/OL]. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2024, 17(04): 505-511.
[14] 萨仁高娃, 张英霞, 邓伟, 闫诺, 樊宁. 超声引导下鼠肝消融术后组织病理特征的变化规律及影响[J/OL]. 中华消化病与影像杂志(电子版), 2023, 13(06): 394-398.
[15] 王小红, 钱晶, 翁文俊, 周国雄, 朱顺星, 祁小鸣, 刘春, 王萍, 沈伟, 程睿智, 秦璟灏. 巯基丙酮酸硫基转移酶调控核因子κB信号介导自噬对重症急性胰腺炎大鼠的影响及机制[J/OL]. 中华消化病与影像杂志(电子版), 2023, 13(06): 422-426.
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