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中华临床医师杂志(电子版) ›› 2017, Vol. 11 ›› Issue (14) : 2033 -2037. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2017.14.005

所属专题: 文献

基础论著

低浓度Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离幼年SD大鼠睾丸间质细胞
李阳1, 王宇1, 程康1, 刘春1,()   
  1. 1. 030001 太原,山西医科大学第一医院泌尿外科
  • 收稿日期:2017-02-16 出版日期:2017-07-15
  • 通信作者: 刘春
  • 基金资助:
    山西省自然科学基金(2015011127)

Isolation of rat Leydig cells with combined low-concentration type Ⅱ and Ⅳ collagenases

Yang Li1, Yu Wang1, Kang Cheng1, Chun Liu1,()   

  1. 1. Department of Urinary Surgery, the First Affiliated Hospital, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China
  • Received:2017-02-16 Published:2017-07-15
  • Corresponding author: Chun Liu
  • About author:
    Corresponding author: Liu Chun, Email:
引用本文:

李阳, 王宇, 程康, 刘春. 低浓度Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离幼年SD大鼠睾丸间质细胞[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2017, 11(14): 2033-2037.

Yang Li, Yu Wang, Kang Cheng, Chun Liu. Isolation of rat Leydig cells with combined low-concentration type Ⅱ and Ⅳ collagenases[J]. Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition), 2017, 11(14): 2033-2037.

目的

探索一种简单有效的大鼠睾丸间质细胞的分离、纯化方法。

方法

采用0.1%Ⅱ、Ⅳ型胶原酶混合液消化组织块分离睾丸间质细胞,用差速贴壁法纯化间质细胞,用3β-HSD免疫荧光染色鉴定间质细胞,同时用酶联法测定间质细胞分泌睾酮的活性。

结果

(1)采用0.1%Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离睾丸间质细胞的最佳酶解时间为1 h左右。(2)利用差速贴壁纯化睾丸间质细胞的最佳贴壁时间为1~2 h。(3)培养24 h后,3β-HSD免疫荧光染色鉴定睾丸间质细胞纯度达(98.1±1.5)%,盼蓝染色鉴定睾丸间质细胞存活率达(97.3±1.6)%。(4)贴壁后培养12 h,睾丸间质细胞即达分泌高峰。

结论

本实验建立了一种简便易行、稳定可靠的原代睾丸间质细胞分离纯化方法,通过此法能够获得足够多具高活性的高纯度睾丸间质细胞,并且睾丸间质细胞增殖能力较强。

Objective

To establish a simple and effective method to isolate and purify rat Leydig cells.

Methods

Leydig cells were digested with a mixture of 0.1% types II and IV collagenases, purified by differential adherence, and identified by 3β-HSD immunofluorescence staining. The testosterone-secreting capability of Leydig cells was determined by ELISA.

Results

The optimal enzyme digestion time for Leydig cells was about 1 hour. The best adherence time for the purification of Leydig cells was 1-2 h. After 24 hours of culture, the purity of Leydig cells was (98.1 ± 1.5)% as revealed by 3β-HSD immunofluorescence staining, and the survival rate of Leydig cells was (97.3 ± 1.6)%. After incubation for 12 hours, the Leydig cells reached the peak of secretion.

Conclusion

In this study, a simple, stable, and reliable method for isolation and purification of primary Leydig cells was established. This method allows to obtain high-purity Leydig cells with high activity.

图3 台盼蓝染色LC细胞图片(×4)
表1 不同酶解时间贴壁2 h所得睾丸间质细胞情况(±s
表2 不同贴壁时间酶解1 h所得睾丸间质细胞情况(±s
图8 蓝光照射下3β-HSD免疫荧光染色Leydig细胞爬片(×10)
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