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中华临床医师杂志(电子版)

中华临床医师杂志(电子版) ›› 2017, Vol. 11 ›› Issue (20) : 2301 -2306. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2017.20.001

所属专题： 文献；

临床论著

微孔板变色硅胶显色法检测结核分枝杆菌耐药性
黄飞1, 陈俊林1,†(), 顾德林1, 瞿梅1, 胡忠义2, 丁元生3   
  1. 1. 226011　南通市第六人民医院结核科
    2. 200433　同济大学附属上海市肺科医院
    3. 201508　上海积彩医疗器械有限公司
  • 收稿日期:2017-03-21 出版日期:2017-10-15
  • 通信作者: 陈俊林
  • 基金资助:
    国家十二五结核重大专项子项目(2013ZX10003001-003-003)

Testing of drug resistance of Mycobacterium tuberculosis by microplate allochroic silica gel assay

Fei Huang1, Junlin Chen1,†(), Delin Gu1, Mei Qu1, Zhongyi Hu2, Yuansheng Ding3   

  1. 1. Department of Tuberculosis Medicine, Nantong Sixth People′s Hospital, Nantong 226011, China
    2. Shanghai Pulmonary Hospital Affiliated to Tongji University, Shanghai 200433, China
    3. Shanghai Jicai Medical Instrument Limited Company, Shanghai 201508, China
  • Received:2017-03-21 Published:2017-10-15
  • Corresponding author: Junlin Chen
  • About author:
    Corresponding author: Chen Junlin, Email:
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引用本文：

黄飞, 陈俊林, 顾德林, 瞿梅, 胡忠义, 丁元生. 微孔板变色硅胶显色法检测结核分枝杆菌耐药性[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2017, 11(20): 2301-2306.

Fei Huang, Junlin Chen, Delin Gu, Mei Qu, Zhongyi Hu, Yuansheng Ding. Testing of drug resistance of Mycobacterium tuberculosis by microplate allochroic silica gel assay[J]. Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition), 2017, 11(20): 2301-2306.

目的

用微孔板变色硅胶显色法检测结核分枝杆菌（MTB）对异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）、链霉素（SM）4种一线抗结核药物的耐药性，并分析该方法的临床应用价值。

方法

对本院2014年1月至2016年12月结核病实验室保存的150株MTB临床分离株用微孔板变色硅胶显色法分别检测4种抗结核药物的耐药性，并与BACTEC MGIT960检测法作比较。

结果

微孔板变色硅胶显色法最佳接种菌量为10-3 mg/ml，检测最佳时间为7~10 d，INH、RFP、EMB、SM 4种药物的最佳MIC判断界值分别为0.25、1、4、2 μg/ml。以Bactec MGIT960药敏结果为标准，微孔板变色硅胶显色法检测四种一线抗结核药物符合率同Bactec MGIT960高度一致，差异无统计学意义（INH：χ2=1.23，P>0.05；RFP：χ2=1.21，P>0.05；EMB：χ2=1.45，P>0.05；SM：χ2=1.25，P>0.05），其准确度分别达96.7%、98.0%、92.0%、96.0%。

结论

微孔板变色硅胶显色法检测MTB的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、便于观察判断等优点，为MTB耐药检测提供了一种较好的方法，适合推广使用。

关键词: 结核分枝杆菌, 异烟肼, 利福平, 乙胺丁醇, 链霉素, 耐药性, 微孔板变色硅胶显色法
Objective

To test the resistance of Mycobacterium tuberculosis to isoniazid (INH), rifampicin (RFP), ethambutol (EMB,) and streptomycin (SM) by using microplate allochroic silica gel assay to assess its clinical application value.

Methods

One hundred and fifty clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from Nantong Sixth People′s Hospital were applied to test their resistance to the four kinds of first-line antituberculous drugs by microplate allochroic silica gel assay, and the results were compared with those obtained by the Bactec MGIT method.

Results

The best concentration of MTB in microwell is 10-3 mg/ml. The time of detection for microplate allochroic silica gel assay was 7-10 days. The best thresholds for detecting drug susceptibility of INH, RFP, EMB, and SM were 0.25 μg/ml, 1 μg/ml, 4 μg/ml, and 2 μg/ml, respectively. According to the results of Bactec MGIT method, the accuracies of the microplate allochroic silica gel assay were 96.7%, 98.0%, 92.0%, and 96.0%, respectively.

Conclusion

The microplate allochroic silica gel assay for detecting drug resistance of Mycobacterium tubercu1osis is accurate, rapid, inexpensive, and simple, and can meet the need of rapid clinical diagnosis.

Key words: Mycobacterium tuberculosis, Isoniazid, Rifampicin, Ethambutol, Streptomycin, Microplate allochroic silica gel assay
图2 24孔板从放大镜中观察到的底部图（测试后）。B1、C1、D1、B4微孔板底硅胶的颜色由天蓝色逐渐变黄色，提示MTB生长
表1 微孔板变色硅胶与MGIT960法检测4种一线抗结核药物药敏结果
药物 MGIT960药敏结果 微孔板变色硅胶药敏结果 符合率（%）
耐药株 敏感株
INH 耐药株 24 2 96.7a
? 敏感株 3 121 ?
RFP 耐药株 35 2 98.0b
? 敏感株 1 112 ?
EMB 耐药株 21 7 92.0c
? 敏感株 5 117 ?
SM 耐药株 30 3 96.0d
? 敏感株 3 114 ?
表2 微孔板变色硅胶显色法检测4种药物药敏报告时间
药物 例数 阳性结果报告时间（d） 阳性报告时间[d，中位数（范围）]
1~2 3~4 5~6 7~8 9~10 11~12 13~14 15~16 17~20 ≥21
INH 150 0 4 11 70 38 14 10 2 0 1 8.1a（5~5）
RFP 150 0 5 18 72 32 13 9 1 0 0 8.0b（5~14）
EMB 150 0 5 12 67 39 15 9 1 1 1 8.2c（5~14）
SM 150 0 6 14 69 41 10 8 1 0 1 8.3d（5~15）
表3 已知药敏MTB菌株MIC值分布表（株）
药物 菌株总数 MGIT960结果 微孔板变色硅胶显色法MIC值（μg/ml）
0.062 5 0.125 0.25 0.5 1 2 4 8 16 32 64
INH 124 S a80 41 0 0 0 0 2 0 0 1 0
26 R a2 0 12 8 2 1 1 0 0 6 0
RFP 113 S - - a91 21 0 0 1 0 0 0 0
37 R - - a2 0 0 5 19 6 0 5 0
EMB 122 S - - a60 22 14 20 1 3 2 0 0
28 R - - a7 0 0 0 0 13 4 2 b2
SM 117 S - - a69 23 22 0 0 1 2 0 0
33 R - - a3 0 0 1 12 15 0 0 b2
表4 4种药物Medcalc分析结果
药物名称 药敏界值（≥μg/ml） 曲线下面积 敏感度（%） 特异度（%） 95%可信区间（%）
INH 0.25 0.962 92.3 97.6 0.904~0.987
RFP 1 0.952 94.6 99.1 0.912~0.998
EMB 4 0.872 75.0 95.9 0.785~0.947
SM 2 0.996 90.9 97.4 0.920~0.996
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