非结核分枝杆菌鉴定方法和病原谱分析

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2022.01.006

目的

分析非结核分枝杆菌（NTM）鉴定方法和病原谱分布情况，为临床NTM的鉴定和病原谱分布提供依据和参考。

方法

连续纳入2020年度安徽省胸科医院培养阳性的分枝杆菌培养物进行病原谱分析，采用MPB64抗原和PNB鉴别培养基对培养阳性菌株进行初步鉴定，熔解曲线法进行NTM分子生物学鉴定，并采用微孔板法进行药敏分析。

结果

2 563株分枝杆菌培养阳性菌株，最终有207株鉴定为NTM，NTM的分离率为8.08%其中，117例为男性感染者，62.80%的感染者年龄超过60岁。排名前3位的菌种依次为胞内分枝杆菌（76.67%）、堪萨斯分枝杆菌（6.19%）、脓肿分枝杆菌（5.71%）。不同NTM对利奈唑胺、克拉霉素、莫西沙星和阿米卡星的敏感性较高，对多西环素、米诺环素、亚胺培南、磺胺甲唑的耐药率较高。

结论

安徽省胸科医院NTM感染以男性和60岁以上感染者居多，胞内分枝杆菌为主要菌种，不同菌种的耐药率有所差异，应提升实验室检测NTM和耐药性的水平，为临床精准诊治NTM提供依据。

关键词: 非结核分枝杆菌, 病原谱分析, 药物敏感性试验, 精准诊治

Objective

To identify and analyze the pathogen spectrum distribution of non-tuberculous mycobacteria (NTM), to provide a basis and reference for clinical NTM identification and pathogen spectrum distribution.

Methods

The positive cultures of mycobacteria from Anhui Chest Hospital in 2020 were continuously included for identification and analysis. MPB64 antigen and PNB identification medium were used to preliminarily identify the culture-positive strains. The melting curve method was used for molecular biological identification of NTM. The antimicrobial susceptibility analysis of NTM was carried out using the microplate method.

Results

There were 2 563 culture positive strains of mycobacteria, and finally 207 strains were identified as NTM. The separation rate of NTM was 8.08%. Among the patients with NTM infections, 117 were male, and 62.80% were over 60 years old. The top three strains were Mycobacterium intracellulare (76.67%), Mycobacterium kansas (6.19%), and Mycobacterium abscesses (5.71%). The NTMs were sensitive to linezolid, clarithromycin, moxifloxacin, and amikacin, and had high resistance rates to doxycycline, minocycline, imipenem, and sulfamethazole.

Conclusion

The majority of cases with NTM infections are male and over 60 years old. Mycobacterium intracellulare is the main strain of NTM, and the resistance rates of different strains are different. The level of laboratory testing for NTM and drug resistance should be improved to provide a basis for clinical accurate diagnosis and treatment of NTM infections.

Key words: Non-tuberculous mycobacteria, Pathogen spectrum analysis, Drug sensitivity test, Precise diagnosis and treatment

表1 MPB64抗原和PNB培养对非结核分枝杆菌（NTM）的初步鉴定结果（株）

MPB64抗原	PNB培养基		合计
MPB64抗原	阳性	阴性	合计
阳性	3	12	15
阴性	215	6	221
合计	218	18	236

表1 MPB64抗原和PNB培养对非结核分枝杆菌（NTM）的初步鉴定结果（株）

MPB64抗原	PNB培养基		合计
MPB64抗原	阳性	阴性	合计
阳性	3	12	15
阴性	215	6	221
合计	218	18	236

表2 非结核分枝杆菌（NTM）感染患者的性别、年龄分布

年龄（岁）	男		女		合计
年龄（岁）	例数	构成比（%）	例数	构成比（%）	例数	构成比（%）
≤20	0	0	2	2.22	2	0.97
21~40	9	7.69	4	4.44	13	6.28
41~60	28	23.93	34	37.78	62	29.95
＞60	80	68.38	50	55.56	130	62.80
合计	117	100.00	90	100.00	207	100.00

表2 非结核分枝杆菌（NTM）感染患者的性别、年龄分布

年龄（岁）	男		女		合计
年龄（岁）	例数	构成比（%）	例数	构成比（%）	例数	构成比（%）
≤20	0	0	2	2.22	2	0.97
21~40	9	7.69	4	4.44	13	6.28
41~60	28	23.93	34	37.78	62	29.95
＞60	80	68.38	50	55.56	130	62.80
合计	117	100.00	90	100.00	207	100.00

表3 非结核分枝杆菌（NTM）菌种鉴定结果

菌种	菌株数	分离率（%）
胞内分枝杆菌	161	77.78
堪萨斯分枝杆菌	13	6.28
脓肿分枝杆菌	12	5.80
龟分枝杆菌脓肿亚种	6	2.90
鸟分枝杆菌	4	1.93
副戈登分枝杆菌	3	1.45
马萨分枝杆菌	3	1.45
沃林斯基分枝杆菌	1	0.48
哥伦比亚分枝杆菌	1	0.48
马德里分枝杆菌	1	0.48
马尔摩分枝杆菌	1	0.48
鸟胞内复合体分枝杆菌	1	0.48
合计	207	100.00

表3 非结核分枝杆菌（NTM）菌种鉴定结果

菌种	菌株数	分离率（%）
胞内分枝杆菌	161	77.78
堪萨斯分枝杆菌	13	6.28
脓肿分枝杆菌	12	5.80
龟分枝杆菌脓肿亚种	6	2.90
鸟分枝杆菌	4	1.93
副戈登分枝杆菌	3	1.45
马萨分枝杆菌	3	1.45
沃林斯基分枝杆菌	1	0.48
哥伦比亚分枝杆菌	1	0.48
马德里分枝杆菌	1	0.48
马尔摩分枝杆菌	1	0.48
鸟胞内复合体分枝杆菌	1	0.48
合计	207	100.00

表4 非结核分枝杆菌（NTM）耐药率分析［株（%）］

药物名称	胞内分枝杆菌（161株）	堪萨斯分枝杆菌（13株）	脓肿分枝杆菌（12株）	龟分枝杆菌脓肿亚种（6株）	其他NTM（15株）
利奈唑胺	34（21.12）	0（0）	1（8.33）	1（16.67）	3（20.00）
多西环素	158（97.52）	13（100.00）	12（100.00）	6（100.00）	14（93.33）
克拉霉素	9（4.97）	0（0）	4（33.33）	2（33.33）	2（13.33）
米诺环素	160（98.76）	12（92.31）	10（83.33）	6（100.00）	13（86.67）
利福平	14（8.70）	2（15.38）	11（91.67）	6（100.00）	2（13.33）
亚胺/西司	158（97.52）	13（100.00）	11（91.67）	6（100.00）	15（100.00）
妥布霉素	15（9.32）	11（84.62）	10（83.33）	5（83.33）	4（26.67）
乙胺丁醇	42（25.47）	3（23.08）	11（91.67）	6（100.00）	6（40.00）
加替沙星	74（45.34）	4（30.77）	9（75.00）	6（100.00）	4（26.67）
莫西沙星	5（3.11）	1（7.69）	3（25.00）	2（33.33）	1（6.67）
阿米卡星	1（0.62）	3（23.08）	1（8.33）	0（0.00）	1（6.67）
磺胺甲唑	138（85.09）	13（100.00）	10（83.33）	4（66.67）	12（80.00）
阿奇霉素	47（28.57）	5（38.46）	7（58.33）	5（83.33）	8（53.33）
头孢西丁	42（26.09）	12（92.31）	4（33.33）	2（33.33）	2（13.33）
利福布汀	12（7.45）	2（15.38）	8（66.67）	5（83.33）	2（13.33）

表4 非结核分枝杆菌（NTM）耐药率分析［株（%）］

药物名称	胞内分枝杆菌（161株）	堪萨斯分枝杆菌（13株）	脓肿分枝杆菌（12株）	龟分枝杆菌脓肿亚种（6株）	其他NTM（15株）
利奈唑胺	34（21.12）	0（0）	1（8.33）	1（16.67）	3（20.00）
多西环素	158（97.52）	13（100.00）	12（100.00）	6（100.00）	14（93.33）
克拉霉素	9（4.97）	0（0）	4（33.33）	2（33.33）	2（13.33）
米诺环素	160（98.76）	12（92.31）	10（83.33）	6（100.00）	13（86.67）
利福平	14（8.70）	2（15.38）	11（91.67）	6（100.00）	2（13.33）
亚胺/西司	158（97.52）	13（100.00）	11（91.67）	6（100.00）	15（100.00）
妥布霉素	15（9.32）	11（84.62）	10（83.33）	5（83.33）	4（26.67）
乙胺丁醇	42（25.47）	3（23.08）	11（91.67）	6（100.00）	6（40.00）
加替沙星	74（45.34）	4（30.77）	9（75.00）	6（100.00）	4（26.67）
莫西沙星	5（3.11）	1（7.69）	3（25.00）	2（33.33）	1（6.67）
阿米卡星	1（0.62）	3（23.08）	1（8.33）	0（0.00）	1（6.67）
磺胺甲唑	138（85.09）	13（100.00）	10（83.33）	4（66.67）	12（80.00）
阿奇霉素	47（28.57）	5（38.46）	7（58.33）	5（83.33）	8（53.33）
头孢西丁	42（26.09）	12（92.31）	4（33.33）	2（33.33）	2（13.33）
利福布汀	12（7.45）	2（15.38）	8（66.67）	5（83.33）	2（13.33）

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