基于TLR4/NF-κB通路探究益气活血清热解毒方对动脉粥样硬化模型大鼠的干预效果

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2022.04.011

中华临床医师杂志(电子版) ›› 2022, Vol. 16 ›› Issue (04) : 349 -355. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2022.04.011

基础研究

基于TLR4/NF-κB通路探究益气活血清热解毒方对动脉粥样硬化模型大鼠的干预效果

刘志勇¹, 任德启²^,^†(

), 郭健², 赵彦青¹, 杨明辉², 李锋森², 成家宏²

^1. 450046　郑州，河南中医药大学第二临床医学院脑病科；450002　郑州，河南省中医院脑病科
^2. 450002　郑州，河南省中医院脑病科

收稿日期:2021-08-04 出版日期:2022-04-15
通信作者: 任德启
基金资助:
王松龄全国名老中医药专家工作室(国中医药人教发2018134号); 河南省中医药科学研究专项重点课题(20-21ZY1024); 河南省中医药拔尖人才培养项目(豫中医科教201835号); 河南省中医院中青年学术骨干（35-45）培育

Investigation of interventional effect of Yiqi Huoxue Qingre Jiedu recipe on atherosclerosis rats based on TLR4/NF-κB pathway

Zhiyong Liu¹, Deqi Ren²^,^†(), Jian Guo², Yanqing Zhao¹, Minghui Yang², Fengsen Li², Jiahong Cheng²

^1. Department of Encephalopathy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China; Department of Encephalopathy, Henan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450002, China
^2. Department of Encephalopathy, Henan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450002, China

Received:2021-08-04 Published:2022-04-15
Corresponding author: Deqi Ren

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引用本文：

刘志勇, 任德启, 郭健, 赵彦青, 杨明辉, 李锋森, 成家宏. 基于TLR4/NF-κB通路探究益气活血清热解毒方对动脉粥样硬化模型大鼠的干预效果[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2022, 16(04): 349-355.

Zhiyong Liu, Deqi Ren, Jian Guo, Yanqing Zhao, Minghui Yang, Fengsen Li, Jiahong Cheng. Investigation of interventional effect of Yiqi Huoxue Qingre Jiedu recipe on atherosclerosis rats based on TLR4/NF-κB pathway[J]. Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition), 2022, 16(04): 349-355.

目的

研究基于Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）通路探究益气活血清热解毒方对动脉粥样硬化模型大鼠的干预效果。

方法

将60只大鼠随机分为正常组10只、其余50只大鼠建立动脉粥样硬化模型作为动脉粥样硬化组，喂养4周后每组随机抽样2只，取主动脉经HE染色光镜观察，以发现动脉粥样硬化斑块为建模成功，建模成功后将动脉粥样硬化组剩余48只大鼠分为模型组（9只）、辛伐他汀组（9只）、益气活血组（10只）、清热解毒组（10只）、益气活血清热解毒中药组（10只）5个亚组。建模成功后益气活血组、清热解毒组、益气活血清热解毒中药组分别给予药液9 ml/（kg·d）体重灌胃，辛伐他汀片组给予辛伐他汀药液5 ml/（kg·d）体重灌胃，正常组和模型组给予生理盐水9 ml/（kg·d），以上各组均连续灌胃8周。对比分析各组的血脂指标甘油三脂（TG）、血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、超敏C反应蛋白（Hs-CRP）、白介素-6（IL-6）水平及TLR4/NF-κB通路蛋白表达量。

结果

与正常组相比，模型组、辛伐他汀组、益气活血组、清热解毒组、益气活血清热解毒中药组TG、TC、LDL-C、Hs-CRP、IL-6水平升高，HDL-C水平降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比，辛伐他汀组、益气活血组、清热解毒组、益气活血清热解毒中药组TG、TC、LDL-C、Hs-CRP、IL-6水平降低，HDL-C水平升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与辛伐他汀组、益气活血组、清热解毒组相比，益气活血清热解毒中药组TG、TC、LDL-C、Hs-CRP、IL-6水平降低，HDL-C水平升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与模型组相比，益气活血清热解毒中药组TLR4、NF-κB表达量降低（P=0.001）。

结论

益气活血清热解毒方可起到调节动脉粥样硬化大鼠血脂、缓解炎症症状的作用，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。

关键词: TLR4/NF-κB通路, 益气活血清热解毒方, 动脉粥样硬化, 干预效果

Objective

To explore the interventional effect of Yiqi Huoxue Qingre Jiedu (Qi-tonifying, blood circulation-activating, heat-clearing, and detoxification) recipe on atherosclerosis rats based on the TLR4/NF-κB pathway.

Methods

Sixty rats were randomly divided into either a normal group (10 rats) or an atherosclerosis group (50 rats; atherosclerosis was induced). After feeding for 4 weeks, two rats were randomly selected from each group, and the aorta was dissected and observed under a light microscope after HE staining to find atherosclerotic plaque. After successful modeling, the remaining 48 rats in the atherosclerosis group were divided into five groups: model group (9 rats), simvastatin group (9 rats), Qi-tonifying and blood circulation-activating group (10 rats), heat-clearing and detoxification group (10 rats), and Qi-tonifying, blood circulation-activating, heat-clearing, and detoxification group (10 rats). The Qi-tonifying and blood circulation-activating group, the heat-clearing and detoxification group, and the Qi-activating, blood circulation-activating, heat-clearing, and detoxification group were given the corresponding traditional Chinese medicine recipes at 9 ml/kg/d body weight, respectively; the simvastatin tablet group was given 5 mg/(kg·d) body weight of simvastatin solution, and the normal group and the model group were given 9 ml/kg/d of normal saline. All the treatments were given intragastrically for 8 consecutive weeks. The levels of TG, TC, LDL-C, HDL-C, hs-CRP, and IL-6 and the protein expression of TLR4 and NF-κB in different groups were compared and analyzed.

Results

Compared with the normal group, the levels of TG, TC, LDL-C, hs-CRP, and IL-6 were significantly increased in the model group, simvastatin group, Qi-tonifying and blood circulation-activating group, heat-clearing and detoxification group, and Qi-tonifying, blood circulation-activating, heat-clearing, and detoxification groups, while the level of HDL-C was significantly decreased (P＜0.05). Compared with the model group, the levels of TG, TC, LDL-C, hs-CRP, and IL-6 were significantly decreased in the simvastatin group, Qi-tonifying and blood circulation-activating group, heat-clearing and detoxification group, and Qi-tonifying, blood circulation-activating, heat-clearing, and detoxification group, while the level of HDL-C was significantly increased (P＜0.05). Compared with the simvastatin group, Qi-tonifying and blood circulation-activating group, and heat-clearing and detoxification group, the levels of TG, TC, LDL-C, hs-CRP, and IL-6 in the Qi-tonifying, blood circulation-activating,, heat-clearing, and detoxification group were significantly decreased, while the level of HDL-C was significantly increased (P＜0.05). Compared with the model group, the protein expression of TLR4 and NF-κB was significantly reduced in the Qi-tonifying, blood circulation-activating,, heat-clearing, and detoxification group (P=0.001).

Conclusion

Yiqi Huoxue Qingre Jiedu recipe can regulate blood lipids and relieve inflammatory symptoms in atherosclerotic rats via mechanisms that may be related to the inhibition of the TLR4/NF-κB pathway.

Key words: TLR4/NF-κB pathway, Yiqi Huoxue Qingre Jiedu recipe, Atherosclerosis, Interventional effect

图1 光镜下病理切片对照（HE染色，×200）。图a为正常大鼠组；图b为动脉粥样硬化大鼠组注：黑色箭头为脂质、钙盐、泡沫细胞

图2 病理特征比较（HE染色，×200）。图a为正常组；图b为模型组；图c为辛伐他汀组；图d为益气活血组；图e为清热解毒组；图f为益气活血清热解毒中药组注：黑色箭头为脂质、钙盐、泡沫细胞

表1 各组血脂指标表达水平比较（

x ˉ

±s）

组别	例数	TG（mmol/L）	TC（mmol/L）	HDL-C（mmol/L）	LDL-C（mmol/L）
正常组	8	0.65±0.06	1.09±0.17	2.79±0.20	0.29±0.08
模型组	9	1.93±0.16^a	3.25±0.30^a	1.04±0.10^a	1.32±0.10^a
辛伐他汀组	9	1.34±0.11^ab	2.65±0.27^ab	1.63±0.13^ab	0.88±0.08^ab
益气活血组	10	1.33±0.09^ab	2.55±0.19^ab	1.67±0.18^ab	0.86±0.07^ab
清热解毒组	10	1.32±0.10^ab	2.54±0.17^ab	1.69±0.16^ab	0.85±0.08^ab
益气活血清热解毒中药组	10	0.86±0.07^abc	1.40±0.12^abc	2.21±0.22^abc	0.51±0.05^abc
F值		10.091	6.806	8.673	10.727
P值		＜0.001	＜0.001	＜0.001	＜0.001

表1 各组血脂指标表达水平比较（

x ˉ

±s）

组别	例数	TG（mmol/L）	TC（mmol/L）	HDL-C（mmol/L）	LDL-C（mmol/L）
正常组	8	0.65±0.06	1.09±0.17	2.79±0.20	0.29±0.08
模型组	9	1.93±0.16^a	3.25±0.30^a	1.04±0.10^a	1.32±0.10^a
辛伐他汀组	9	1.34±0.11^ab	2.65±0.27^ab	1.63±0.13^ab	0.88±0.08^ab
益气活血组	10	1.33±0.09^ab	2.55±0.19^ab	1.67±0.18^ab	0.86±0.07^ab
清热解毒组	10	1.32±0.10^ab	2.54±0.17^ab	1.69±0.16^ab	0.85±0.08^ab
益气活血清热解毒中药组	10	0.86±0.07^abc	1.40±0.12^abc	2.21±0.22^abc	0.51±0.05^abc
F值		10.091	6.806	8.673	10.727
P值		＜0.001	＜0.001	＜0.001	＜0.001

表2 各组Hs-CRP、IL-6水平比较（

x ˉ

±s）

组别	例数	Hs-CRP（ng/L）	IL-6（ng/L）
正常组	8	80.51±8.12	35.98±3.55
模型组	9	170.45±17.11^a	74.24±7.26^a
辛伐他汀组	9	150.44±15.02^ab	60.25±6.35^ab
益气活血组	10	149.99±15.21^ab	60.11±6.44^ab
清热解毒组	10	149.50±14.98^ab	60.08±6.35^ab
益气活血清热解毒中药组	10	95.41±9.58^abc	42.36±4.02^abc
F值		5.253	5.279
P值		＜0.001	＜0.001

表2 各组Hs-CRP、IL-6水平比较（

x ˉ

±s）

组别	例数	Hs-CRP（ng/L）	IL-6（ng/L）
正常组	8	80.51±8.12	35.98±3.55
模型组	9	170.45±17.11^a	74.24±7.26^a
辛伐他汀组	9	150.44±15.02^ab	60.25±6.35^ab
益气活血组	10	149.99±15.21^ab	60.11±6.44^ab
清热解毒组	10	149.50±14.98^ab	60.08±6.35^ab
益气活血清热解毒中药组	10	95.41±9.58^abc	42.36±4.02^abc
F值		5.253	5.279
P值		＜0.001	＜0.001

表3 各组主动脉组织TLR4/NF-κB通路蛋白表达量对比（

x ˉ

±s）

组别	例数	TLR4	NF-κB
正常组	8	0.61±0.08	0.59±0.05
模型组	9	1.78±0.16^a	1.84±0.17^a
辛伐他汀组	9	1.22±0.11^ab	1.31±0.13^ab
益气活血组	10	1.21±0.10^ab	1.30±0.14^ab
清热解毒组	10	1.19±0.09^ab	1.29±0.12^ab
益气活血清热解毒中药组	10	0.85±0.07^abc	0.79±0.08^abc
F值		10.182	9.231
P值		＜0.001	＜0.001

表3 各组主动脉组织TLR4/NF-κB通路蛋白表达量对比（

x ˉ

±s）

组别	例数	TLR4	NF-κB
正常组	8	0.61±0.08	0.59±0.05
模型组	9	1.78±0.16^a	1.84±0.17^a
辛伐他汀组	9	1.22±0.11^ab	1.31±0.13^ab
益气活血组	10	1.21±0.10^ab	1.30±0.14^ab
清热解毒组	10	1.19±0.09^ab	1.29±0.12^ab
益气活血清热解毒中药组	10	0.85±0.07^abc	0.79±0.08^abc
F值		10.182	9.231
P值		＜0.001	＜0.001

图3 动脉组织TLR4/NF-κB通路蛋白WB图注：TLR4为Toll样受体4；NF-κB为核因子κB；GAPDH为甘油醛-3-磷酸脱氢酶；WB为蛋白质印迹法

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Investigation of interventional effect of Yiqi Huoxue Qingre Jiedu recipe on atherosclerosis rats based on TLR4/NF-κB pathway

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